二氧化碳培养箱控制二氧化碳的浓度是通过二氧化碳浓度传感器来进行的。二氧化碳传感器用来检测箱体内二氧化碳浓度，将检测结果传递给控制电路及电磁阀等控制器件，如果检测到箱内二氧化碳浓度偏低，则电磁阀打开，二氧化碳进入箱体内，直到二氧化碳浓度达到所设置浓度，此时电磁阀关闭，箱内二氧化碳切断，达到稳定状态。二氧化碳采样器将箱内二氧化碳和空气混合后的气体取样到机器外部面板的采样口，以随时用二氧化碳浓度测定仪来检测二氧化碳的浓度是否达到要求。
目前大多数的二氧化碳培养箱是通过增湿盘的蒸发作用产生湿气的(其产生的相对湿度水平可达95%左右，但开门后湿度恢复速度很慢)。因为湿度蒸发面积越大，越容易达到相对饱和湿度并且开关门后的湿度恢复的时间越短。所以湿度蒸发面积大的培养箱较湿度蒸发面积小的培养箱容易保持相对饱和湿度。
有的产品在出厂前已完成温度校准工作，校准部件均安装在箱内的控制板上，用户不宜再作调整。对于面板上有校准微调的产品，可在接近培养温度下(如37℃)，取一根精密温度计置于箱内，待温度稳定后观察温度计指示值，如与显示值不跗，调整微调使其相附即可。
温度的校准步骤：
①在培养箱内放置一个准确的玻璃管式水银温度计，以校准所设定温度。同时，再放置一个准确的体温计，以校准极限温度。
②把温度旋钮调到所需温度37℃。
③把极限温度旋钮调到最高。等待24小时，让机器达到稳定。
④如果温度还没达到37℃，再调整温度旋钮到37℃，然后再等待24小时，让机器最后达到稳定。
⑤当培养箱稳定在37℃后，按逆时针方向转动极限温度旋钮，直到该极限温度旋钮的指示灯明亮为止。
⑥再小心地把极限温度旋钮顺时针方向转动，直到指示灯刚好熄灭为止。
注意:机器正常运转期间，其极限温度指示灯应保持熄灭状态。当箱内温度高于极限温度时，该指示灯点亮报警。如果面板液晶显示温度与箱内温度计读数不符，可进一步调整校准。首先，调整显示器点，直到读数与水银温度计的读数相吻合，然后，等待数小时，让机器稳定。如果还不相符，可重复上一步骤，直到机器达到最终稳定。
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